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南宫28全速开发温启动逆转录酶:快速精准,持久稳定的新型全预混试剂

来源:任磊军 日期:2025-03-21

随着冬季的到来,季节性流感和肺炎等呼吸道疾病的发病率显著上升,多地医院就诊高峰频现。在此背景下,为患者提供及时有效的治疗,快速且准确的诊断方法愈加重要。在众多检测技术中,一步RT-qPCR法凭借其高效、便捷及灵敏的优势,受到广泛青睐。

南宫28全速开发温启动逆转录酶:快速精准,持久稳定的新型全预混试剂

在一步法反应中,基因特异性引物理论上应与待检测靶标严格匹配,并通过逆转录酶的催化合成第一链cDNA。然而,实际应用中经常出现错误的模板-引物匹配,导致非特异cDNA的产生。这种非特异性cDNA会导致扩增系统中出现非特异性扩增,消耗反应所需材料,从而限制后续反应的进行。当靶核酸浓度较低时,竞争效应可能使扩增性能下降,表现为扩增曲线形态不佳、荧光增量低及Ct值延迟,严重影响检测试剂的灵敏度与特异性。

此外,一管式RNA全预混试剂的酶液、引物探针及反应液在长期保存过程中,活性容易下降或失活,进而影响试剂性能。逆转录(RT)酶作为关键成分,其性能直接关系到一步法核酸检测试剂的准确性和灵敏度。因此,提升逆转录酶的特异性和稳定性,对开发一管式RNA全预混试剂至关重要。

为此,南宫28针对一步法RT-qPCR/PCR场景与一管式RNA全预混试剂,创新推出温启动逆转录酶。该酶在低温下处于封闭状态,工作温度下迅速激活,有效降低低温下引物-模板匹配错误,显著提升检测的特异性和灵敏度。采用适配体的方法进行热启动修饰,南宫28利用适配体筛选平台,建立了庞大的寡核苷酸随机序列文库,并在传统SELEX适配体筛选技术基础上进行优化,转向高通量测序,经过多轮筛选和富集,最终筛选出与逆转录酶亲和力高的适配体。通过在低温和工作温度下的酶活性测试,南宫28确定了最佳的适配体组合。

经过大量的筛选和优化,南宫28开发的温启动逆转录酶在42℃下可封闭99%的酶活性,相较于市场上同类产品,其低温封闭效果更佳、稳定性更强,使反应液在长期存储中依然保持高效性。同时,在工作温度55℃时,该酶可释放95%以上的活性,确保试剂的扩增灵敏度。产品在非工作温度(30℃/37℃/42℃)下酶活性极低,封闭效率显著高于竞品A,极大地有利于控制非特异性扩增。并且在工作温度(55℃)下,活性完全释放,对扩增性能无任何负面影响。

南宫28的温启动逆转录酶具备超快速的cDNA合成能力,在相同PCR程序下,2分钟的逆转录可达到15分钟逆转录的灵敏度。经过37℃加压7天的稳定性测试,南宫28的温启动逆转录酶性能稳定,而竞品A则出现了显著的性能下降,灵敏度延迟超过2个Ct。

南宫28温启动逆转录酶在实际应用中有效帮助客户解决了多个问题,特别是在RNA全预混液体的稳定性方面,展现出卓越的效果。在与市面上同类温启动逆转录酶对比时,南宫28的产品能够在更高温度下封闭酶活性,效率更高,稳定性更强,有效防止关键成分降解。在37℃加压10天的处理测试中,使用南宫28温启动逆转录酶配制的全预混试剂表现与新配制的对照组无显著差异,而使用竞品A则明显降低了扩增效率(Ct值延后,荧光平台期下降)。这种性能充分凸显了南宫28的技术优势。

总的来说,南宫28温启动逆转录酶为生物医疗领域提供了一种新型高性能的核酸检测试剂,具有极高的特异性与灵敏度,适用于各种复杂的检测需求。

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