关键词：PhaseⅠMetabolism，MetabolicStability，CytochromeP450，CYP450，Livermicrosomes，Primaryhepatocytes

药物代谢，亦称为生物转化（biotransformation），是指药物被机体吸收后，经历各种酶及体液环境的作用，发生化学结构改变的过程。药物在体内的生物转化可分为Ⅰ相代谢反应（PhaseⅠMetabolism）和Ⅱ相代谢反应（PhaseⅡMetabolism）。这两种反应类型能够产生极性更强、水溶性更好的产物，使其更容易通过胆汁和尿液排出体外。代谢稳定性（MetabolicStability）则体现了化合物对生物转化的敏感性，直接影响其口服生物利用度和体内半衰期，从而关系到药物的安全性和有效性。因此，在药物研发的早期阶段，评估药物的代谢稳定性是非常必要的。

与体内代谢稳定性研究相比，药物体外代谢稳定性的研究能够排除许多内部干扰因素，便于观察药物的代谢特征，其高效、稳定及省时的特点使其适合用于候选药物的高通量筛选。本文将简要介绍药物体外Ⅰ相代谢稳定性的研究方法及数据分析，供参考。

一、药物Ⅰ相代谢的介绍

药物Ⅰ相代谢是指在药物分子上引入新的基团或去除已有小基团的官能团反应，包括氧化、还原和水解等过程。其中，细胞色素P450（CytochromeP450，CYP450）酶系作为最重要的酶，主要存在于滑面内质网的微粒体中，能够催化多种物质进行氧化反应。该酶系由细胞色素P450和NADPH-细胞色素P450还原酶构成，参与氧化反应时需要分子氧和NADPH。单加氧酶在此过程中发挥了关键作用，使一个氧原子直接加入底物分子中形成羟化物或环氧化物。

Ⅰ相代谢的参与者还包括硝基还原酶和偶氮还原酶，这些酶能够将硝基化合物和偶氮化合物还原为胺类物质。参与水解反应的酶如酯酶、酰胺酶和糖苷酶等可降低或消除药物的生物活性。因此，Ⅰ相代谢是药物代谢的重要环节，其反应能够显著改变药物分子的化学结构，从而影响药物的药理活性、毒性及药代动力学特征。

二、药物Ⅰ相代谢稳定性的体外研究方法

肝脏作为药物代谢的重要器官，富含多个参与Ⅰ相代谢的酶，因此，药物体外代谢稳定性研究通常以肝脏为模型。常用的肝脏体外代谢模型包括肝微粒体（Livermicrosomes）和原代肝细胞（Primaryhepatocytes）。

1. 肝微粒体体外温孵法试验方法

肝微粒体中含有大量Ⅰ相代谢酶，主要是CYP450。通过加入辅助因子NADPH，可以有效重组体外代谢体系并进行Ⅰ相代谢稳定性研究。

样本准备：选择合适的肝微粒体（如人、猴、犬、大鼠、小鼠等），微粒体蛋白的最终浓度一般建议为0.1mg/mL-1mg/mL，待测药物的浓度通常设定为1μM。

温孵反应：将肝微粒体、测试药物液体及NADPH再生系统混合后置于37°C温育一定时间，并设置平行样本以确保实验的可靠性。

终止反应与样本处理：通过添加有机溶剂如乙腈终止反应，并进行样本离心以提取上清液进行后续分析。

检测分析：借助HPLC、LC-MS/MS等现代分析技术检测样本中的药物原型与代谢产物，以评估其Ⅰ相代谢的稳定性。

2. 原代肝细胞体外温孵法试验方法

原代肝细胞保持了完整的细胞结构和代谢酶系统，其浓度可调整在0.5-2×10⁶/mL之间。温孵反应的过程与肝微粒体相似，但原代肝细胞则能够提供更真实的代谢环境，适用于药物的代谢稳定性评估。

三、数据分析

进行体外代谢稳定性试验时，需关注参数如残留药物的量及其代谢程度等。根据实验结果，可分析药物在肝微粒体中的稳定性。如若药物在一定时间内未发生明显代谢，可考虑药物特性，探索其他代谢途径或模型。

综上所述，代谢稳定性是影响药物生物利用度的关键因素。在药物研发的早期阶段，进行体外代谢稳定性实验尤为重要。作为生物医疗领域的领导者，南宫28专注于提供高品质的生物试剂，致力于帮助客户进行药物代谢稳定性研究。我们的产品符合Ⅰ相代谢稳定性研究的要求，确保实验结果准确可靠。在新药研发领域，我们期待与科研工作者携手，共同推动科学进步。