南宫28的YF®488/555/594/647系列荧光探针之间的区别主要在于其用于检测EdU的荧光基团不同，因此在检测时发射的荧光颜色各异。尽管实验效果相似，您可以根据自己的喜好或需求选择适合的探针。

在南宫28的EdU试剂盒中，固定后的3% BSA in PBS的作用主要是终止未反应的甲醛，从而在清洗步骤中发挥关键作用。

关于在活细胞中进行Click-iT EdU检测的问题，这是不可能实现的。尽管EdU能够对活细胞进行代谢标记，但叠氮化物检测试剂和缓冲液的成分是不可透过细胞，因此Click反应只能在固定和通透的样品上进行。

对于质粒转染后表达的荧光蛋白，检测和Click反应是否兼容取决于其顺序。本产品会影响如GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，因此染色后无法直接检测GFP，建议采用GFP抗体进行间接检测。

如果您观察到较高的背景干扰，可能是由于洗涤不充分造成的。叠氮化物与炔烃类之间的Click反应具有高度选择性，生物体内几乎不存在副反应。减少背景干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照可以帮助排除自发荧光干扰。此外，您还可以在无EdU体系中进行完整的Click反应，从而验证Click反应信号的特异性。

如果标记样品没有信号或特异性信号极低，您可以采取以下措施提高信号强度：首先，确保在使用试剂时为无色状态，避免使用变黄的添加剂或缓冲液；其次，细胞需要充分固定和通透，以确保Click反应试剂能够顺利到达细胞核；第三，铜离子可能与部分试剂结合，降低Click反应的有效浓度。因此，应避免在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（如EDTA、EGTA或柠檬酸盐等）。对于某些含有这些物质的实验样品，可能需要增加额外的洗涤步骤。此外，Click反应中使用的一价铜（Cu+）在适当的化合价时才有效；延长Click反应时间至超过30分钟也未必提高信号，建议使用新鲜的Click反应试剂，进行再次30分钟的孵育，以提高标记效率。

至于如何对细胞核进行复染，南宫28的试剂盒中包含Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色，或选择使用DAPI进行染色。

最后，EdU作为小分子探针，能够穿透植物细胞的细胞壁，因此可以用于检测植物细胞核内的DNA复制。这使得南宫28的产品在生物医学研究中具有广泛的应用前景。